在生物制药领域，中国仓鼠卵巢（Chinese Hamster Ovary, CHO）细胞因其高表达水平和良好的蛋白质翻译后修饰能力而被广泛应用于重组蛋白和单克隆抗体的生产。CHO细胞株的成功构建是实现高效生产的关键步骤之一。以下是CHO细胞株构建的基本流程：
1. 目标基因的准备
首先需要获得目标基因序列，并对其进行优化以适应CHO细胞的密码子偏好性。通过合成或扩增的方式获取目标基因，并将其插入到合适的表达载体中。
2. 载体系统选择
根据实验需求选择适当的载体系统，常见的有基于质粒的瞬时表达系统和稳定整合表达系统。对于大规模生产的细胞株，通常采用稳定整合表达系统。
3. 细胞转染
使用电穿孔法、脂质体介导法或其他方法将重组载体导入CHO细胞。转染效率直接影响后续筛选的成功率。
4. 筛选与克隆
利用抗生素抗性标记或荧光标记进行阳性克隆的选择。通过有限稀释法或流式细胞术分选技术得到单克隆细胞系。
5. 稳定性和产量评估
对筛选出的单克隆细胞株进行稳定性测试，包括生长特性、表达水平以及产物质量等多方面的评估。确保所选细胞株能够长期稳定地生产所需产品。
6. 工艺开发与放大
在实验室规模验证后，还需进一步开展工艺优化工作，如培养基配方调整、补料策略设计等，最终实现工业化生产的可能性。
以上就是CHO细胞株构建的主要流程概述。每一步骤都需要严谨的操作和技术支持，才能保证最终获得高质量的生产用细胞株。随着科学技术的进步，未来还会有更多创新的方法应用于CHO细胞株的构建当中。
