CCK-8（Cell Counting Kit-8）是一种广泛应用于细胞活性和增殖测定的试剂盒。它基于WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯偶氮)-3-(4-硝基苯偶氮)-5-(2,4-二磺酸钠苯偶氮)-2,7-二磺酸二钠盐）化合物的显色反应。这种试剂盒因其灵敏度高、操作简便以及对细胞无毒性而受到科研人员的青睐。

原理概述

当细胞存活时，它们会通过代谢活动将WST-8转化为橙黄色的formazan产物。这个转化过程依赖于细胞内的脱氢酶，这些酶在活跃的细胞中含量较高。因此，formazan的生成量可以间接反映细胞的数量和活性。通过比色法测量溶液中formazan的吸光度，就可以定量评估细胞的生存状态。

实验步骤简述

1. 准备样品：将待测细胞接种到96孔板或其他适当的培养容器中。

2. 加入CCK-8试剂：按照说明书的比例向每个孔中添加适量的CCK-8溶液。

3. 孵育：将含有细胞与CCK-8混合物的培养板置于恒温箱内进行孵育一段时间。

4. 读取数据：使用分光光度计在450nm波长下测定各孔的吸光度值。

5. 数据分析：根据标准曲线计算出细胞的数量或活性。

注意事项

- 确保所有操作都在无菌条件下进行以避免污染。

- 不同类型的细胞可能需要调整CCK-8的用量及孵育时间。

- 在实验设计时应设置空白对照组以便校正背景信号。

总之，CCK-8检测方法以其高效性和准确性成为生命科学研究领域不可或缺的一部分。通过对这一技术背后科学原理的理解，研究人员能够更好地优化实验条件并获得可靠的结果。